眾所周知，養(yǎng)殖場的消毒池是門衛(wèi)消毒系統(tǒng)一個關鍵組成部分，是隔絕外界病原微生物進入養(yǎng)殖場內(nèi)環(huán)境的重要門戶。筆者通過調(diào)查走訪多家規(guī)模養(yǎng)豬場和養(yǎng)雞場，了解到目前規(guī)模場技術人員對消毒池的消毒劑選擇、更換頻率、消毒效果的認知存在許多誤區(qū)。因此筆者模擬消毒池狀況對當前消毒池多種常用消毒劑進行殺菌對比試驗，希望試驗結果能對規(guī)模養(yǎng)殖場的相關技術人員起到參考借鑒作用。
　　一、材料

　　1、消毒劑：NaOH水溶液（2%水溶液，燒堿為市場采購工業(yè)級，25KG裝，含量98%，批號：20150304）；消毒威水溶液（含二氯異氰脲酸鈉30%，由湖南五指峰有限公司提供，批號：20150501，按1:1200倍稀釋）；五指峰新菌敵水溶液（含量：戊二醛5%+癸甲溴銨5%，批號：20150517，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:500倍稀釋）；好典水溶液（含聚維酮碘5%，批號：20150602，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:300倍稀釋）。

　　2、消毒劑指標菌：大腸埃希氏菌（8099）、多殺性巴氏桿菌（禽株）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、蠟狀桿菌芽孢（SSICl/1）。（均購自中國獸藥監(jiān)察所）
　　3、中和劑的配制
　　（1）中和劑（1）：自制復合中和劑，用于中和消毒威水溶液、新菌敵水溶液、好典水溶液。精密稱取無水磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2g、硫代硫酸鈉5g、卵磷脂3g、甘氨酸3g、吐溫-80各30mL。將各成分加入到1L蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20min，冰箱保存?zhèn)溆谩＃ㄒ陨显噭┖驮囁幘徸試幖瘓F化學試劑有限公司）
　　（2）中和劑（2）：2%NaOH水溶液，需要等當量的酸來中和。因此，通過計算摩爾含量，將5.56g含量為36%的濃HCl溶液加入1000g純化水中配制成NaOH水溶液中和劑，于121℃壓力蒸氣滅菌20min，冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 　　4、稀釋液：氯化鈉注射液（0.9%）。（購自四川科倫藥業(yè)公司）
　　二、方法｛參照《獸用消毒劑鑒定技術規(guī)范》（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號｝
　　1、中和劑選擇試驗：選擇指定濃度的消毒劑，以蠟樣桿菌芽孢和大腸桿菌為受試菌，分別進行中和劑鑒定試驗。試驗可分為6組：第1組：消毒劑＋菌懸液；第2組：（消毒劑＋菌懸液）＋中和劑；第3組：中和劑＋菌懸液；第4組：（消毒劑＋中和劑）＋菌懸液；第5組：稀釋液＋菌懸液；第6組：中和劑＋稀釋液。
　　2、細菌、芽孢懸液定量殺菌試驗
　　（1）將制備的菌液進行活菌計數(shù)，然后用氯化鈉注射液稀釋成含菌106～107CFU/mL的試驗菌液；
　　（2）將消毒劑樣品用純化水按指定稀釋比例稀釋至測試濃度；
　　（3）吸取0.5mL試驗菌液于4.5mL測試濃度的消毒劑溶液內(nèi)；
　　（4）置20℃水浴中作用5分鐘；
　　（5）立即吸取上述菌藥混合液1.0mL，加入9.0mL中和液中混勻；
　　（6）以氯化鈉注射液（0.9%）代替消毒液，同時進行上述各步驟，作為對照組；
　　（7）以上各步驟均設置一個平行對照；
　　（8）中和10分鐘后進行活菌計數(shù)，37℃培養(yǎng)24h，計算殺菌率；
　　（9）模擬消毒池實際狀況，將各試驗消毒劑敞開暴露在室外，每天重復進行上述試驗，共7天，記錄試驗數(shù)據(jù)，分析試驗結果。
　　三、結果
　　1、中和劑選擇試驗的試驗結果為第1組不長菌或有極少數(shù)菌生長；第2組長少量菌且比第1組多，比第3、4、5組的菌數(shù)少；第3、4、5組的菌數(shù)相當且誤差率小于15%；第6組無污染。說明所配制中和劑在細菌和芽孢的殺菌試驗中可有效中和本消毒劑，并對細菌、芽孢及培養(yǎng)基無不良影響。
　　

　　2、消毒劑（第一天）對細菌、芽孢懸液定量殺菌試驗結果見表一。

　　3、試驗持續(xù)7天，每天重復殺菌試驗效果見表二。

　　四、結論
　　2%NaOH水溶液、湖南五指峰生化有限公司生產(chǎn)的消毒威1:1200倍稀釋、新菌敵1：500倍稀釋、好典1:300倍稀釋的水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），作用5分鐘對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺滅率99.9%以上，其消毒效能符合規(guī)定。
　　四種試驗消毒劑對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢四種消毒劑指標菌的殺滅率在第一天都能達到99.9%以上，其消毒效能符合要求。2%NaOH水溶液在第二天殺菌率未達到99.9%以上；30%消毒威1:1200倍稀釋的水溶液在第四天殺菌率未達到99.9%以上；新菌敵1：500倍稀釋的水溶液在第三天殺菌率未達到99.9%以上；好典1:300倍稀釋的水溶液在第二天殺菌率未達到99.9%以上，其消毒效能不符合規(guī)定。
　　五、說明
　　1、依據(jù)《現(xiàn)代藥理實驗方法》的體外殺菌實驗的菌落計數(shù)方法，低于5個菌落的視同為殺菌完全，故試驗消毒劑大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺菌率計為100%；
　　2、氯化鈉注射液對照組的平板均有大量細菌生長，其菌落數(shù)按試驗菌液100倍稀釋后的菌落數(shù)計算。
　　3、依據(jù)《獸用消毒劑鑒定技術規(guī)范》（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號的試驗消毒效能判斷標準，殺滅指數(shù)須達103或殺菌率達99.9%以上，故試驗消毒劑消毒效能符合規(guī)定。
　　六、分析
　　通過試驗結果可知，四種消毒池常用消毒劑在現(xiàn)配現(xiàn)用的情況下都具有良好的消毒效果，具有速效、強效的殺滅效力，在5分鐘內(nèi)即車輪緩慢經(jīng)過消毒池時能有效消毒。在持續(xù)7天的試驗中可見，NaOH水溶液和好典稀釋液在暴露室外的第二天還能維持90%以上對四種消毒劑指標菌的殺滅率，在第四天殺菌率下降一半，在第六天基本不具備殺菌能力。分析其原因，NaOH水溶液能與空氣中的二氧化碳反應生成NaCO3，使溶液中NaOH含量迅速下降，導致殺菌效力急速遞減；好典中的聚維酮碘在高溫和陽光曝曬下急速分解，含量急速下降，使殺菌效力快速降低。這兩種消毒劑不適合長期使用，因此建議養(yǎng)殖場用戶不要在消毒池使用NaOH和聚維酮碘溶液。消毒威和新菌敵稀釋液在1-2天內(nèi)能維持99.9%以上的殺菌率，在第四天還能維持90%左右的殺菌率，在第七天還具有60%～80%的殺菌率，具有高效、速效、長效作用，能做為消毒池專用消毒劑使用。消毒威主要成分為二氯異氰脲酸鈉，是一種高效、廣譜、新型內(nèi)吸性殺菌劑，可殺滅各種細菌、藻類、真菌和病毒；化學性質(zhì)穩(wěn)定，便于貯存運輸；使用安全、簡便、用量少、藥效持續(xù)時間長；作用在物體表面能慢慢地釋放次氯酸（HClO），通過使菌體蛋白質(zhì)變性，改變膜通透性，干擾酶系統(tǒng)生理生化及影響DNA合成等過程，使病原體迅速死亡。新菌敵主要含有戊二醛和癸甲溴銨。戊二醛屬高效消毒劑，具有廣譜、高效、低毒、對金屬腐蝕性小、受有機物影響小、穩(wěn)定性好等特點，主要作用于菌體蛋白的巰基、羥基、羧基和氨基，可使之烷基化，引起蛋白質(zhì)凝固造成細菌死亡。癸甲溴銨為雙鏈季銨鹽類陽離子表面活性劑，其季銨陽離子能主動吸引并富集于帶負電荷的細菌和病毒表面，阻礙細菌代謝，導致其膜的通透性發(fā)生改變。二者復配而成的新菌敵消毒劑，對各類病原微生物具有高效、速效、長效的殺滅作用，使用后殘留少、安全、環(huán)保，是理想的新型復配消毒劑。
　　通過結論分析，我們推薦在養(yǎng)殖場消毒池使用30%消毒威（通用名：二氯異氰脲酸鈉粉）按1:1200倍稀釋、新菌敵（通用名：戊二醛癸甲溴銨溶液）按1:500倍稀釋進行車輪和鞋底消毒，每5-6天更換1次；不建議使用燒堿（NaOH）和聚維酮碘溶液消毒。